１ 材料與方法

Ｌａｍｂｄａ ３６５ 紫外／ 可見分光光度計和 ＬＳ ５５ 熒光 光譜儀， 美國 Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ 公司； ＺＷＹ?２４０ 恒溫搖 床， 上海智誠分析儀器制造有限公司；ＭＩＫＲＯ ２００Ｒ 高速離心機， 德國 Ｈｅｔｔｉｃｈ 公司；ＢＧ?ｖｅｒＭＩＤＩ 蛋白質 電泳儀，北京百晶生物技術有限公司；Ｓｉｇｍａ ３?１８ＫＳ 冷 凍 離 心 機， 德 國 Ｓｉｇｍａ 離 心 機 有 限 公 司； ＧｅｎｏＳｅｎｓ１８５０ 凝膠成像儀， 上海勤翔科學儀器有限 公司；博迅BXM-30R立式壓力蒸汽滅菌器，上海博迅醫療 生物儀器股份有限公司。

２ 結果與分析

在大腸桿菌胞內合成藻藍蛋白的過程中，最佳溫度 常設定在 １８ ℃左右 。 本研究中，首先參照胞內合成 的條件，在１６ ℃的條件下加入 １ ｍｍｏｌ／ Ｌ 的 ＩＰＴＧ 表達 ＣｐｃＢ 直到６０ ｈ，胞外培養基中沒有檢測 到任何 ＣｐｃＢ 熒光；在沒有 ＩＰＴＧ 的條件下，也沒有檢測到熒光。 低溫下胞內合成的藻藍蛋白不 向胞外分泌，這可能與低溫抑制細胞的生長率和轉運蛋 白的表達有關 。 而在３７ ℃，無論是添加 ＩＰＴＧ 還是沒 有添加 ＩＰＴＧ，都不能檢測到培養基中 ＣｐｃＢ 的熒光。 較 高溫度下過表達的蛋白質容易形成包涵體并在內膜附 近積累，阻斷蛋白質的易位通道，減少分泌。 另外，藻 藍蛋白的色素化也可能受阻。 在 ２５ ℃沒有 ＩＰＴＧ 存在 的情況下，表達２４ ｈ 后培養基展現明顯 的 ＣｐｃＢ 熒光，并且隨著表達時間的增加，熒光強度逐步 升高。 這些結果表明溫度是影響胞外分泌的關鍵因素， 而２５ ℃是促進藻藍蛋白胞外分泌的較好溫度，這與先 前研究的其他蛋白胞外分泌最佳溫度一致 ，表達溫度 應該保持細胞生長和蛋白合成的平衡以促使胞外分泌。

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